México D.F. viernes 17 de abril de 2009
C-04-03
PURIFICACION Y CARACTERIZACION DE LECTINAS DE SEMILLAS AMARANTO CULTIVADO EN EL ESTADO DE HIDALGO
Julia Dolores Salgado Telpalo, Maria del Carmen Valadez Vega
Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo, Instituto de Ciencias de la Salud
Palabras clave: lectinas, amaranto, eritrocitos
Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo, Instituto de Ciencias de la Salud
Palabras clave: lectinas, amaranto, eritrocitos
Introducción. El amaranto es un pseudocereal con un muy
alto valor nutritivo por su alto contenido de proteínas,
aminoácidos y minerales (1), sin embargo puede contener
factores antinutricionales que interfieren negativamente, en la
absorción y metabolismo de sustancias nutritivas (2). Uno de
los factores antifisiológicos más estudiados son las lectinas
que son glicoproteínas, de origen no inmunológico, que se
caracterizan por ligar carbohidratos o glicoconjugados con
alta especificidad, uniéndose de manera reversible sin alterar
su estructura covalente (3). Las lectinas despiertan gran
interés científico debido al gran potencial que poseen cuando
se utilizan de forma pura en reacciones biológicas para fines
de diagnósticos clínicos e investigaciones de estructura de
proteínas y carbohidratos en células pudiendo obtener
diversos tratamientos alternativos a enfermedades como lo es
el cáncer.
El objetivo del presente trabajo fue la extracción, purificación
y caracterización bioquímica y fisicoquímica de lectinas de
semillas de amaranto cultivado en el Estado de Hidalgo.
Metodología. La extracción de la lectina se realizo mediante
la metodología reportada por Mejía y col, 1989. La
purificación de la lectina se llevo a cabo mediante
cromatografía de afinidad utilizando una matriz de estroma de
eritrocitos humanos. La lectina purificada se caracterizó
mediante su actividad hemaglutinante utilizando eritrocitos
humanos y de animales (4), estudios de inhibición de la
aglutinación, determinación de peso molecular mediante
electroforesis nativa y desnaturalizante, contenido de
carbohidratos totales (5), determinación de metales, efecto de
iones metálicos sobre la hemaglutinación, estabilidad al pH y
termoestabilidad.
Resultados y discusión. La lectina fue purificada
presentando un solo pico después de ser eluido con ácido
acético. La lectina de amaranto es una glicoproteína (3.69 %
carbohidratos totales). Esta compuesta por dos subunidades
con un peso molecular de 26.68 y 28.43 kDa. Es una
metaloproteína que contiene y biológica iones iones
(Cuadro 1 , solo se encuentra en el original)
Ca2+, Mg2+, Mn2+, Cu2+ y Zn2+. La lectina presenta mayor
especificidad hacia eritrocitos humanos tipo O tripsinizados y
sin tripsinizar; lo que se indica que es una lectina específica
para la fucosa que es un carbohidrato presente en la
membrana de los eritrocitos. Asimismo, es más afín hacia
eritrocitos de hámster y de conejo. Presenta inhibición de la
aglutinación cuando es tratada con monosacáridos; es muy
estable a pH 6.0, 7.0, 7.5 y 8.0; y presenta una alta estabilidad
y actividad biológica a temperaturas entre 25-60ºC ya que a
temperaturas mayores la actividad hemaglutinante disminuye
considerablemente debido a la desnaturalización de las
proteínas.
(Fig. 1. Estabilidad de la lectina AM a diferentes condiciones de
pH(izq) y temperatura (der), solo se encuentra en el original).
Conclusiones. Hoy en día es interesante conocer más acerca
de la función e identificación de lectinas, por lo que en el
presente trabajo se realizó la purificación y caracterización de
lectinas de semillas de amaranto cultivado en el Estado de
Hidalgo con la finalidad de encontrar una fuente potencial de
estas proteínas para su utilización posterior en estudios
biológicos.
Agradecimiento. Agradecemos a la Universidad Autónoma
del Estado de Hidalgo y al Instituto Nacional de Pediatría por
las facilidades otorgadas
Bibliografía. 1. Lehmann, J. 1991. The industrialization and
commercialization of Amaranth an alternate approach. In: Primer
Congreso Internacional del Amaranto. Oaxtepec, Morelos. México.
Septiembre 22-27.
2. Valle, P. Lucas B. 2000. Toxicología de alimentos. Documento
publicado en Inst Nac Sal Pub. 219-222.
3. Rini, J. 1995. Lectin structure. Annu. Rev. Biomol. Struct. 24:
551-77.
4. Jaffé, W. 1980. Hemagglutinin. ln: Toxic constituents of plant
foodstuff. Ed. by lE. Liener. New York, U.S.A., Academic Press. 73-
102.
5. Dubois, M., Gilles, K., Hamilton, J., Rebers, A., Smith, F.
1956. Colorimetric method for determination of sugars and
related substances. Anal Chem. 28: 350-356.
Recopilación
Edith y Enrique
alto valor nutritivo por su alto contenido de proteínas,
aminoácidos y minerales (1), sin embargo puede contener
factores antinutricionales que interfieren negativamente, en la
absorción y metabolismo de sustancias nutritivas (2). Uno de
los factores antifisiológicos más estudiados son las lectinas
que son glicoproteínas, de origen no inmunológico, que se
caracterizan por ligar carbohidratos o glicoconjugados con
alta especificidad, uniéndose de manera reversible sin alterar
su estructura covalente (3). Las lectinas despiertan gran
interés científico debido al gran potencial que poseen cuando
se utilizan de forma pura en reacciones biológicas para fines
de diagnósticos clínicos e investigaciones de estructura de
proteínas y carbohidratos en células pudiendo obtener
diversos tratamientos alternativos a enfermedades como lo es
el cáncer.
El objetivo del presente trabajo fue la extracción, purificación
y caracterización bioquímica y fisicoquímica de lectinas de
semillas de amaranto cultivado en el Estado de Hidalgo.
Metodología. La extracción de la lectina se realizo mediante
la metodología reportada por Mejía y col, 1989. La
purificación de la lectina se llevo a cabo mediante
cromatografía de afinidad utilizando una matriz de estroma de
eritrocitos humanos. La lectina purificada se caracterizó
mediante su actividad hemaglutinante utilizando eritrocitos
humanos y de animales (4), estudios de inhibición de la
aglutinación, determinación de peso molecular mediante
electroforesis nativa y desnaturalizante, contenido de
carbohidratos totales (5), determinación de metales, efecto de
iones metálicos sobre la hemaglutinación, estabilidad al pH y
termoestabilidad.
Resultados y discusión. La lectina fue purificada
presentando un solo pico después de ser eluido con ácido
acético. La lectina de amaranto es una glicoproteína (3.69 %
carbohidratos totales). Esta compuesta por dos subunidades
con un peso molecular de 26.68 y 28.43 kDa. Es una
metaloproteína que contiene y biológica iones iones
(Cuadro 1 , solo se encuentra en el original)
Ca2+, Mg2+, Mn2+, Cu2+ y Zn2+. La lectina presenta mayor
especificidad hacia eritrocitos humanos tipo O tripsinizados y
sin tripsinizar; lo que se indica que es una lectina específica
para la fucosa que es un carbohidrato presente en la
membrana de los eritrocitos. Asimismo, es más afín hacia
eritrocitos de hámster y de conejo. Presenta inhibición de la
aglutinación cuando es tratada con monosacáridos; es muy
estable a pH 6.0, 7.0, 7.5 y 8.0; y presenta una alta estabilidad
y actividad biológica a temperaturas entre 25-60ºC ya que a
temperaturas mayores la actividad hemaglutinante disminuye
considerablemente debido a la desnaturalización de las
proteínas.
(Fig. 1. Estabilidad de la lectina AM a diferentes condiciones de
pH(izq) y temperatura (der), solo se encuentra en el original).
Conclusiones. Hoy en día es interesante conocer más acerca
de la función e identificación de lectinas, por lo que en el
presente trabajo se realizó la purificación y caracterización de
lectinas de semillas de amaranto cultivado en el Estado de
Hidalgo con la finalidad de encontrar una fuente potencial de
estas proteínas para su utilización posterior en estudios
biológicos.
Agradecimiento. Agradecemos a la Universidad Autónoma
del Estado de Hidalgo y al Instituto Nacional de Pediatría por
las facilidades otorgadas
Bibliografía. 1. Lehmann, J. 1991. The industrialization and
commercialization of Amaranth an alternate approach. In: Primer
Congreso Internacional del Amaranto. Oaxtepec, Morelos. México.
Septiembre 22-27.
2. Valle, P. Lucas B. 2000. Toxicología de alimentos. Documento
publicado en Inst Nac Sal Pub. 219-222.
3. Rini, J. 1995. Lectin structure. Annu. Rev. Biomol. Struct. 24:
551-77.
4. Jaffé, W. 1980. Hemagglutinin. ln: Toxic constituents of plant
foodstuff. Ed. by lE. Liener. New York, U.S.A., Academic Press. 73-
102.
5. Dubois, M., Gilles, K., Hamilton, J., Rebers, A., Smith, F.
1956. Colorimetric method for determination of sugars and
related substances. Anal Chem. 28: 350-356.
Recopilación
Edith y Enrique
No hay comentarios:
Publicar un comentario